Thanh bên bài viết

PDF
Ngày xuất bản: 27/06/2023
Số lượt xem tóm tắt: 150
Số lượt xem PDF: 160
DOI: https://doi.org/10.51298/vmj.v527i1B.5741
Số xuất bản
Tập 527 Số 1B (2023)
Chuyên mục
Các bài báo
Trích dẫn bài báo
Nguyễn, Q. T., Nguyễn, L. T. H., Mai, H. N., & Thái, K. M. (2023). TẠO DÒNG VÀ BIỂU HIỆN INTERLEUKIN-2 NGƯỜI DUNG HỢP VỚI SUMO TRÊN ESCHERICHIA COLITẠO DÒNG VÀ BIỂU HIỆN INTERLEUKIN-2 NGƯỜI DUNG HỢP VỚI SUMO TRÊN ESCHERICHIA COLI. Tạp Chí Y học Việt Nam, 527(1B). https://doi.org/10.51298/vmj.v527i1B.5741

TẠO DÒNG VÀ BIỂU HIỆN INTERLEUKIN-2 NGƯỜI DUNG HỢP VỚI SUMO TRÊN ESCHERICHIA COLITẠO DÒNG VÀ BIỂU HIỆN INTERLEUKIN-2 NGƯỜI DUNG HỢP VỚI SUMO TRÊN ESCHERICHIA COLI

Nguyễn Quốc Thái1,, Nguyễn Lê Thanh Huyền1, Mai Huỳnh Như1, Thái Khắc Minh1
1 Đại học Y Dược Thành phố Hồ Chí Minh

Nội dung chính của bài viết

Tóm tắt

Đặt vấn đề: Interleukin-2 (IL-2) đang được quan tâm trong điều trị ung thư và các bệnh tự miễn. Tuy nhiên, ở Việt Nam, nguồn IL-2 dùng cho các thử nghiệm in vitro có giá thành cao. Mục đích: tạo được IL-2 người tái tổ hợp dạng dung hợp với tag SUMO trên Escherichia coli. Phương pháp: Tạo dòng chủng E. coli BL21(DE3) mang plasmid tái tổ hợp pET-SUMO-il2 có khả năng biểu hiện IL-2 người ở dạng dung hợp với SUMO. Khảo sát các điều kiện nuôi cấy để thu protein dạng tan: môi trường (LB, TB, ZYP-5052); nồng độ IPTG (0,02; 0,1; 0,5 mM); nhiệt độ (25 °C và 37 ℃). Tinh chế IL-2 dạng dung hợp bằng sắc ký ái lực cố định ion kim loại (IMAC). Kết quả: Chủng E. coli BL21(DE3) mang plasmid tái tổ hợp pET-SUMO-il2 có khả năng tạo IL-2 dạng dung hợp với hiệu suất cao trong môi trường TB cảm ứng với IPTG 0,1 mM ở 25 ℃. Từ 200 mL dịch nuôi cấy tinh chế thu được khoảng 108 mg protein. Kết luận: Nghiên cứu đã tạo dòng thành công chủng E. coli BL21(DE3) mang plasmid tái tổ hợp pET-SUMO-il2 có khả năng tạo IL-2 tan ở dạng dung hợp với tag SUMO với hiệu suất cao và được tinh chế thành công qua cột Ni Sepharose

Chi tiết bài viết

Từ khóa

interleukin-2 người tái tổ hợp, pET-SUMO, E. coli

Tài liệu tham khảo

1. Abbas, A. K., Trotta, E., R. Simeonov, D., Marson, A., & Bluestone, J. A. (2018). Revisiting IL-2: Biology and therapeutic prospects. Science immunology, 3(25):1482.
2. Nguyễn Quốc Thái, Nguyễn Lê Thanh Huyền, Mai Huỳnh Như, Thái Khắc Minh (2023), “Dự đoán khả năng hoà tan và thiết kế vector biểu hiện interleukin-2 người trên Escherichia coli”, Tạp chí Y học Việt Nam, Tập 526, tháng 6, số X, tr.
3. Studier, F. W. (2005) “Protein production by auto-induction in high-density shaking cultures”, Protein expression and purification, 41(1), pp. 207-234.
4. Bradford, M. M. (1976). “A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding”, Analytical biochemistry, 72(1-2), pp. 248-254.
5. Panavas, T., Sanders, C., & Butt, T. R. (2009). SUMO fusion technology for enhanced protein production in prokaryotic and eukaryotic expression systems. SUMO protocols, 303-317.
6. Zhang, M., Jiang, X., Su, Z., Lin, J., Xiang, Q., Yang, Z.,... & Li, X. (2012). Large-scale expression, purification, and glucose uptake activity of recombinant human FGF21 in Escherichia coli. Applied microbiology and biotechnology, 93, 613-621.
7. Peciak, K., Tommasi, R., Choi, J. W., Brocchini, S., & Laurine, E. (2014). Expression of soluble and active interferon consensus in SUMO fusion expression system in E. coli. Protein expression and purification, 99, 18-26.
8. Tileva, M., Krachmarova, E., Ivanov, I., Maskos, K., & Nacheva, G. (2016). Production of aggregation prone human interferon gamma and its mutant in highly soluble and biologically active form by SUMO fusion technology. Protein Expression and Purification, 117, 26-34.