Thanh bên bài viết
Số lượt xem PDF: 263
QUY TRÌNH KỸ THUẬT REAL-TIME PCR SYBR CHẨN ĐOÁN BIẾN THỂ RS216321 TRÊN GEN VWF Ở NGƯỜI BỆNH XUẤT HUYẾT NỘI SỌ TỰ PHÁT
Nội dung chính của bài viết
Tóm tắt
Mục tiêu: Xây dựng quy trình kỹ thuật real-time PCR SYBR chẩn đoán biến thể rs216321 trên gen VWF ở bệnh nhân xuất huyết nội sọ tự phát. Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Thiết kế 3 đoạn mồi đặc hiệu cho biến thể, đánh giá độ đặc hiệu đoạn mồi và tối ưu hóa nồng độ đoạn mồi. Xác định đặc điểm chẩn đoán biến thể rs216321 của phản ứng real-time PCR trên hệ thống QuantStudio 5 (Thermo Fisher). Áp dụng quy trình đã tối ưu lên 22 mẫu đã được giải trình tự Sanger nhằm đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu và độ xác thực. Kết quả: Xây dựng thành công quy trình real-time PCR bao gồm: thiết kế và đánh giá độ đặc hiệu 3 đoạn mồi bằng phương pháp điện di gel Labchip (1 đỉnh cường độ sáng phân tách rõ), tối ưu hóa nồng độ đoạn mồi (250 nM), xác định được giá trị |ΔCt| = 3 để phân biệt kiểu gen. Độ nhạy, độ đặc hiệu, độ xác thực đạt 100%. Kết luận: Đã xây dựng quy trình real-time PCR để xác định biến thể đa hình đơn nucleotide rs216321 trên gen VWF. Quy trình áp dụng trên người bệnh, làm cơ sở để khảo sát cỡ mẫu lớn mang tính đại diện. Từ đó tạo nên nguồn dữ liệu, thông tin về biến thể trên quần thể người Việt Nam.
Chi tiết bài viết
Tài liệu tham khảo
2. Scotland G, Biobank MGB, Biobank U, et al. Global Biobank Meta-analysis Initiative: Powering genetic discovery across human disease. Cell Genomics. 2022:9.
3. Alzahrani FM, Aldossary N and Hassan FM. Phenotypic and Genotypic Characterization of von Willebrand Factor Gene (Exon 18 and 20) in Saudi Healthy Individuals. Med Arch. 7. 2020; 74 (5):337-341. 10.5455/medarh.2020.74.337-341.
4. Elek Z, Losoncz E, Maricza K, et al. Missense Variants of von Willebrand Factor in the Background of COVID-19 Associated Coagulopathy. Genes (Basel). 2023; 14(3). 10.3390/genes14030617.
5. Guo H, You M, Wu J, et al. Genetics of spontaneous intracerebral hemorrhage: risk and outcome. Front Neurosci. 2022; 16:455.
6. Han J-H, Lee J-M, Koh E-J and Choi H-YJJOKNS. The spot sign predicts hematoma expansion, outcome, and mortality in patients with primary intracerebral hemorrhage. J Korean Neurosurg Soc. 2014; 56(4):303-309.
7. Hemphill Iii JC, Greenberg SM, Anderson CS, et al. Guidelines for the management of spontaneous intracerebral hemorrhage: a guideline for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association. Stroke. 2015; 46(7):2032-2060.
8. National Library of Medicine (NIH). Primer-BLAST. October 5th, 2023. October 5th, 2023. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/.
9. ThermoFisher Scientific. Precision in qPCR. October 5th, 2023. October 5th, 2023. https://www.thermofisher.com/vn/en/home/life-science/pcr/real-time-pcr/real-time-pcr-learning-center/gene-expression-analysis-real-time-pcr-information/precision-qpcr.html.