Thanh bên bài viết

PDF
Ngày xuất bản: 07/08/2023
Số lượt xem tóm tắt: 160
Số lượt xem PDF: 178
DOI: https://doi.org/10.51298/vmj.v528i2.6133
Số xuất bản
Tập 528 Số 2 (2023)
Chuyên mục
Các bài báo
Trích dẫn bài báo
Đinh, T. T., Nguyễn, C. T., Nguyễn, P. T., Ngô, T. T., & Lê, H. S. (2023). XÂY DỰNG QUY TRÌNH BIỂU HIỆN ENZYM TÁI TỔ HỢP BR512, ỨNG DỤNG PHÁT HIỆN HUMAN PAPILLOMAVIRUS TYPE 18 BẰNG PHƯƠNG PHÁP KHUẾCH ĐẠI ĐẲNG NHIỆT. Tạp Chí Y học Việt Nam, 528(2). https://doi.org/10.51298/vmj.v528i2.6133

XÂY DỰNG QUY TRÌNH BIỂU HIỆN ENZYM TÁI TỔ HỢP BR512, ỨNG DỤNG PHÁT HIỆN HUMAN PAPILLOMAVIRUS TYPE 18 BẰNG PHƯƠNG PHÁP KHUẾCH ĐẠI ĐẲNG NHIỆT

Đinh Thị Thảo1, Nguyễn Cẩm Thạch1, Nguyễn Phú Thành1, Ngô Tất Trung1, Lê Hữu Song1
1 Bệnh viện Trung ương Quân đội 108

Nội dung chính của bài viết

Tóm tắt

Mục tiêu: Xây dựng quy trình biểu hiện enzym tái tổ hợp Br512 và ứng dụng phát hiện Human Papillomavirus type 18 bằng phương pháp khuếch đại đẳng nhiệt qua trung gian vòng lặp (LAMP). Vật liệu và phương pháp: Plasmid pKAR2-Br512 mã hoá enzyme BR512 được biến nạp vào tế bào E.coli BL21(DE3). Enzyme Br512 từ đó được biểu hiện bằng chất cảm ứng đặc hiệu (IPTG) sau đó được tinh sạch bằng phương pháp sắc ký ái lực. Đánh giá đặc tính của enzyme Br512 tự sản xuất, so sánh với enzyme Bst 2.0 (Biolab NewEngland) sử dụng phương pháp LAMP. Kết quả: Enzym Br512 có độ tinh sạch cao, có đầy đủ chức năng so với enzym thương mại Bst 2.0 của hãng New England Biolab, cả 2 enzym có khả năng phát hiện HPV18 ở nồng độ 10 bản sao/phản ứng. Kết luận: Xây dựng thành công quy trình biểu hiện enzym tái tổ hợp Br512, ứng dụng phát hiện HPV18 ở nồng độ 10 bản sao/phản ứng bằng phương pháp khuếch đại đẳng nhiệt qua trung gian vòng lặp

Chi tiết bài viết

Từ khóa

enzyme Br512, khuếch đại đẳng nhiệt qua trung gian vòng lặp, Human Papillomavirus type 18

Tài liệu tham khảo

1. Notomi, T., et al., (2000), "Loop-mediated isothermal amplification of DNA" Nucleic acids research, 28(12): p. E63-E63.
2. Becherer, L., et al., (2020), "Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) – review and classification of methods for sequence-specific detection". Analytical Methods, 12(6): p. 717-746.
3. Chander, Y., et al., (2014), "A novel thermostable polymerase for RNA and DNA loop-mediated isothermal amplification (LAMP)". Front Microbiol, 5: p. 395.
4. Oscorbin, I.P., U.A. Boyarskikh, and M.L. Filipenko, (2015), "Large Fragment of DNA Polymerase I from Geobacillus sp. 777: Cloning and Comparison with DNA Polymerases I in Practical Applications". Mol Biotechnol, 57(10): p. 947-59.
5. Rosano, G.L. and E.A. Ceccarelli, (2014), "Recombinant protein expression in Escherichia coli: advances and challenges". Front Microbiol, 5: p. 172.
6. Kaur, J., A. Kumar, and J. Kaur, (2018), "Strategies for optimization of heterologous protein expression in E. coli: Roadblocks and reinforcements". Int J Biol Macromol, 106: p. 803-822.
7. Scientific, T., (2021), "HisPur_NiNTA_Resin Instruction".
8. Timasheff, K.G.a.S.N., (1981), "Mechanism of Protein Stabilization by Glycerol: Preferential Hydration in Glycerol-Water Mixtures", Biochemistry, 20: p. 4667-4676
9. Vagenende, V., M.G. Yap, and B.L. Trout, (2009), "Mechanisms of protein stabilization and prevention of protein aggregation by glycerol", Biochemistry, 48(46): p. 11084-96.
10. Maranhao, A., et al., (2020), "An improved and readily available version of Bst DNA Polymerase for LAMP, and applications to COVID-19 diagnostics." medRxiv.